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PCR基因扩增仪“位置的边缘效应”实验过程

点击次数:2152 发布时间:2017-06-07
   PCR基因扩增仪“位置的边缘效应”实验过程
  
  PCR基因扩增仪主要是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内InVitro的大量合成,用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。PCR仪的原理为利用升温使DNA变性,用限制性内切酶使DNA双链解链,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。
  
  PCR原理为双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对原则复制成新的单链,与模版配对成为双链分子挎贝。在体外实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计与模板DNA的5’端结合的两条引物,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制,多次重复“变性解链—退火—合成延伸”的循环就可以以几何级数大量扩增特定的基因。这就是PCR实验过程.
  
  想得到一个的PCR实验结果,zui关键所使用的PCR基因扩增仪,温度均性是否稳定均匀.PCR温度均匀是指样品孔间的温度差异,它关系到在不同样品孔进行反应结果的一致。我们在实验中发现有时用同样的样品,同样的PCR反应程序,zui后的结果竟然差异非常明显,或许就是因为不同位置的温度不均一性所致。所以一些实验人在做实验中就固定用着那几个孔,就是因为过往反复的教训和认真的思索得出的结果.这个被我们称为“位置的边缘效应”,即原因就是PCR仪的温度均匀性不好,特别是zui外周的样品孔,温度不均匀就会影响实验结果。
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