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哪些因素会影响核酸提取

更新时间:2021-04-08      点击次数:3846
       全自动核酸提取仪可广泛应用于基因组学、疾控医疗、食品安全、法医鉴定、输血安全、畜牧业与分子学研究等领域,比如鼻咽拭子、唾液、全血、血清、环境样本、分泌物、粪便、动物组织、植物组织、细菌、真菌、病毒、质粒等各种样本的核酸提取,结果稳定。
1.洗涤步骤:
洗涤对于整个提取步骤至关重要,关系到核酸的纯度,核酸的纯度直接影响下游 PCR应用。磁棒的振荡幅度和混合时间会影响洗涤效率。磁棒振荡幅度太小或混合时间太短,有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力。振荡太剧烈或时间太长,会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解,得率下降。
2.裂解步骤:
样本裂解是核酸提取过程中很关键的一步,只有充分裂解了细胞或病原体,才能释放里面的核酸。
磁珠结合效率决定了有多少核酸可以吸附到磁珠上,即洗脱核酸的上限。影响结合效率的因素有磁珠的吸附能力以及结合缓冲液的结合能力。
3.洗脱步骤:
洗脱步骤直接影响核酸得率,影响洗脱效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脱温度和时间。磁珠未充分晾干,可能会有醇类等杂质残留,影响后续 PCR 反应;磁珠过分干燥,核酸可能会干结在磁珠上,导致洗脱效率下降。适当提高洗脱温度和时间,有利于核酸从磁珠上游离下来,时间过长或温度过高,核酸有可能会降解,需要把握其中的平衡。
 
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