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如何提高磁珠法自动核酸提取的提取效率?

更新时间:2022-09-05      点击次数:970
现阶段,常用的核酸提取法为离心柱纯法和磁珠法等,但离心柱纯化法效率低,步骤繁琐。而由于检测机构每天需要处理大量样本,大都是采用自动化核酸提取仪配套磁珠法核酸提取试剂盒的方式进行核酸提取步骤。应用磁珠法的自动核酸提取仪操作简便,容易自动化,是目前市场上的主流。
 
磁珠法——通过裂解液裂解细胞组织样本,从样本中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。利用磁棒吸附携带核酸的磁珠移动至不同的试剂槽内,通过反复快速搅拌、混匀液体,经过细胞裂解、核酸吸附、洗涤与洗脱等步骤,最终得到纯净的核酸。
  
如何提高核酸提取效率,可以尝试以下方法:
 
一、磁珠品质要好
 
首先,磁珠的四氧化三铁核要能做到真正纳米级,100纳米以下;其次,在纳米四氧化三铁表面包裹二氧化硅要均匀密封;三是表面羟基含量要丰富。这样的磁珠比表面积大,磁响应性能强,与核酸的结合能力与释放能力都强。
 
二、裂解液品质好
 
对于提取胞内核酸的应用,我们需要对细胞进行裂解,释放核酸;当裂解不充分时,释放的核酸有限,即使磁珠的吸附能力再强,也很难获得较高的得率。一般可以通过提高表面活性剂浓度,来增强裂解液的裂解能力,表面活性剂能够破坏蛋白的结构,促进膜蛋白的变性,使得细胞膜破裂而充分释放出核酸。
 
三、洗脱要充分
 
洗脱不充分有时候我们裂解结合液各种条件优化到了理想状态,可是核酸得率仍然很低。这种情况有可能是磁珠结合了核酸,但是由于洗脱不充分,磁珠结合的核酸没有被洗脱下来。一般来说0.5mg的磁珠,洗脱液的体积为70-100ul。
 
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